电影一区二区免费精品三区_欧美电影精品久久久久_亚洲国产午夜一区_亚洲av成人午夜在线看见_1204欧美日韩国产成人精品_久久久www亚洲成人精品_久久99精品久久久久久久不卡_亚洲成AV人片久久_国产一级av一区二区三区_伊人久久大香线蕉亚洲

您好,歡迎來(lái)到恒奇儀器!
客服熱線(xiàn):
17317590905
全部產(chǎn)品
實(shí)驗(yàn)室試劑
實(shí)驗(yàn)室耗材
實(shí)驗(yàn)室安全產(chǎn)品
微生物監(jiān)控
實(shí)驗(yàn)室儀器
水質(zhì)環(huán)保監(jiān)控
大氣監(jiān)控
生命科學(xué)
鈣鈦礦電池
恒奇儀器 HQI

品牌中心

行業(yè)解決方案

公司資訊

行業(yè)動(dòng)態(tài)

實(shí)驗(yàn)百科

知識(shí)堂

資料下載

知識(shí)堂

您所在的位置:首頁(yè) > 知識(shí)堂 > 甲醛變性電泳檢測(cè)RNA完整性

甲醛變性電泳檢測(cè)RNA完整性

時(shí)間:2012-3-1 14:43:23作者:admin
甲醛變性電泳檢測(cè)RNA完整性

  
  一、材料、試劑和儀器
  
  1、材料:植物總RNA5-10μg
  
  2、試劑:
  
  1)加樣運(yùn)載緩沖液(Loadingbuffer)
  
  50%甘油
  
  1mmol/LEDTA(pH8.0)
  
  0.25%溴酚藍(lán)
  
  25%二甲苯氰FF
  
  2)10×TAEBuffer
  
  3)5×甲醛凝膠電泳緩沖液:
  
  0.1mol/LMOPs(pH7.0)
  
  40mmol/L乙酸鈉
  
  5mmol/LDETA(pH8.0)
  
  4)甲醛,甲酰胺
  
  3、儀器:電泳裝置,紫外透射觀測(cè)儀
  
  二、實(shí)驗(yàn)程序
  
  1、甲醛變性的瓊脂糖(Agarose)凝膠的配制
  
  在250mL的錐形瓶中準(zhǔn)確稱(chēng)量2gAgarose(Sigama),再加20mL10×TAEBuffer144mLDEPC處理過(guò)的雙蒸水,微波爐中化膠,待冷卻至50-60EB至終濃度≤0.5μg/mL。在通風(fēng)櫥中加入36mL甲醛,放置一段時(shí)間以減少甲醛蒸汽。
  
  2、RNA的甲醛變性電泳
  
  1)樣品制備
  
  RNA總量10μg
  
  甲醛凝膠電泳緩沖液4μl
  
  甲醛3.5μl
  
  甲酰胺10μl
  
  加入無(wú)菌離心管中混合,95水浴變性2min(55,15min),取出后放入冰中冷卻。
  
  2)加入2μl無(wú)菌的DEPC處理的加樣運(yùn)載液。(使用加樣運(yùn)載液的目的有三:增大樣品密度,以確保DNA均勻進(jìn)入樣品孔內(nèi);使樣品呈現(xiàn)顏色,便于加樣操作;能明確顯現(xiàn)樣品在電泳膠上的泳動(dòng)位置。以0.5XTBE作電泳液時(shí),溴苯酚在瓊脂糖中的泳動(dòng)速率與長(zhǎng)300bp的雙鏈線(xiàn)狀DNA相同,而二甲苯氰FF的泳動(dòng)速率與長(zhǎng)4kb的雙鏈線(xiàn)狀DNA相同。)
  
  3)將膠板浸沒(méi)在甲醛凝膠電泳緩沖液中,點(diǎn)樣前5V/cm預(yù)跑5min。點(diǎn)樣后3-4V/cm電泳。
  
  4)電泳結(jié)束后(溴苯酚藍(lán)遷移到約8cm),紫外燈下觀察,照相

QQ在線(xiàn)客服

  • 在線(xiàn)咨詢(xún)
  • QQ交談